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质粒课堂丨质粒原件之抗生素抗性基因

2022-05-07


  在抗生素基因成为质粒原件之前,从培养基平板上筛选出带有目的质粒的克隆是一件相当复杂的事,质粒转入细菌是一个相当低效的过程,其成功率只有0.1%,即10000个细胞只有一个可以被成功转化,从数目庞大的菌落中选出带目的质粒的菌落无疑相当于大海捞针,但抗生素的出现一劳永逸的解决了以上问题,大大加快了实验的效率。

 

   什么是抗生素

   抗生素通常指那些可以杀死或者抑制细胞生长的物质,虽然抗生素源于天然微生物,但现在实验室中许多常用的抗生素都是通过半合成或完全合成的方式制成的。根据抗生素对细菌的作用可以将抗生素分为可以直接杀死细菌的杀菌类抗生素或者对细菌生长有抑制作用的抑菌类抗生素,但这两者之间界限的划分并非泾渭分明,这其中也存在某些灰色地带,部分抑菌类的抗生素在高浓度情况下也能起到杀菌作用。

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Kanamycin sulfate

 

   抗生素使用的注意事项:

   1. 使用新鲜抗生素原液:大部分抗生素在粉状下相当稳定,但在溶液中会快速失活,-20℃,避免重复冻融的情况下大部分抗生素可保存至少6个月。

   2. 氨苄西林抗生素失活格外迅速,配置的平板最好在一个月内使用,使用时要注意卫星菌落!卡贝西林比氨苄西林稳定,可作为氨苄西林的替代品。

   3. 许多大肠杆菌菌种自带抗性,使用时要尤其注意,如果不知道所用菌种的基因型和抗性可以通过该网站E. coli genotypes - OpenWetWare 查看

   下表来自于Addgene,列出了许多抗生素,标明了它们的类型,发挥作用的方式和工作浓度。

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From Addgene

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